สินค้า
ชุดตรวจจับ Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR สำหรับ 2019-nCoV
การใช้งานที่คาดหวัง
ชุดนี้ใช้สำหรับการตรวจหาไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ (2019-nCoV) เชิงคุณภาพโดยใช้ไม้พันคอ, ไม้กวาดหลังโพรงจมูก, น้ำยาล้างหลอดลม, เสมหะ ผลการตรวจหาของผลิตภัณฑ์นี้มีไว้สำหรับการอ้างอิงทางคลินิกเท่านั้น และไม่ควรใช้เป็นเพียงชุดเดียว หลักฐานสำหรับการวินิจฉัยทางคลินิกและการรักษา แนะนำให้ใช้การวิเคราะห์อาการอย่างครอบคลุมร่วมกับอาการทางคลินิกของผู้ป่วยและการทดสอบในห้องปฏิบัติการอื่นๆ
หลักการตรวจสอบ
ชุดนี้ใช้เทคโนโลยี RT-PCR แบบขั้นตอนเดียวอันที่จริงแล้ว ไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ปี 2019 (2019-nCoV) ORF1ab และยีน N ถูกเลือกเป็นพื้นที่เป้าหมายการขยายสัญญาณไพรเมอร์และโพรบฟลูออเรสเซนต์เฉพาะ (โพรบยีน N ระบุด้วย FAM และโพรบ ORF1ab ระบุด้วย HEX) ได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจจับ RNA ของไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 ในตัวอย่างชุดนี้ยังรวมถึงระบบตรวจจับการควบคุมภายในภายนอก (โพรบยีนควบคุมภายในที่ติดฉลากด้วย CY5) เพื่อตรวจสอบกระบวนการเก็บตัวอย่าง การขยาย RNA และ PCR ซึ่งจะช่วยลดผลลัพธ์เชิงลบที่ผิดพลาด
องค์ประกอบหลัก
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ（48T/ชุด） |
| สารละลายปฏิกิริยา RT-PCR | 96µl |
| ไพรเมอร์ nCOV TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| การควบคุมเชิงลบ | 1500µl |
| nCOV การควบคุมเชิงบวก (l ORF1ab N ยีน) | 1500µl |
รีเอเจนต์ของตัวเอง: รีเอเจนต์การสกัด RNA หรือรีเอเจนต์การทำให้บริสุทธิ์การควบคุมเชิงลบ/เชิงบวก: การควบคุมเชิงบวกคือ RNA ที่มีชิ้นส่วนเป้าหมาย ในขณะที่การควบคุมเชิงลบคือน้ำที่ปราศจากกรดนิวคลีอิกระหว่างการใช้งาน ควรมีส่วนร่วมในการสกัดและควรพิจารณาว่าติดเชื้อควรจัดการและกำจัดตามระเบียบที่เกี่ยวข้อง
ยีนอ้างอิงภายในคือยีน RnaseP ของมนุษย์
สภาพการเก็บรักษาและวันหมดอายุ
-20±5℃ หลีกเลี่ยงการแช่แข็งซ้ำและการละลายมากกว่า 5 ครั้ง มีอายุ 6 เดือน
เครื่องมือที่ใช้บังคับ
ด้วย FAM / HEX / CY5 และเครื่องมือ PCR เรืองแสงแบบหลายช่องสัญญาณอื่นๆ
ข้อกำหนดของชิ้นงานทดสอบ
1. ประเภทตัวอย่างที่ใช้บังคับ: ไม้กวาดคอ, ไม้กวาดหลังโพรงจมูก, ของเหลวล้างหลอดลมและเสมหะ
2.การเก็บตัวอย่าง (เทคนิคปลอดเชื้อ)
ไม้กวาดคอหอย: เช็ดต่อมทอนซิลและผนังคอหอยด้านหลังด้วยไม้กวาดสองอันพร้อมกัน จากนั้นจุ่มหัวไม้กวาดลงในหลอดทดลองที่มีสารละลายสุ่มตัวอย่าง
เสมหะ: หลังจากที่ผู้ป่วยมีอาการไออย่างหนัก ให้เก็บเสมหะที่ไอในหลอดทดลองฝาเกลียวที่มีสารละลายตัวอย่างของเหลวล้างหลอดลม: เก็บตัวอย่างโดยแพทย์ผู้เชี่ยวชาญ3. การจัดเก็บและการขนส่งตัวอย่าง
ควรทำการทดสอบตัวอย่างสำหรับการแยกไวรัสและการทดสอบ RNA โดยเร็วที่สุดตัวอย่างที่สามารถตรวจพบได้ภายใน 24 ชั่วโมงสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 ℃;ที่ไม่สามารถตรวจพบได้ภายใน 24
ชั่วโมงควรเก็บไว้ที่ -70℃ หรือต่ำกว่า (หากไม่มีสภาวะการเก็บ -70℃ ควรเป็น
เก็บชั่วคราวที่อุณหภูมิ -20°C ในตู้เย็น)ตัวอย่างควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและการละลายซ้ำระหว่างการขนส่งควรส่งตัวอย่างไปยังห้องปฏิบัติการโดยเร็วที่สุดหลังจากเก็บตัวอย่างหากต้องขนส่งตัวอย่างในระยะทางไกล แนะนำให้เก็บน้ำแข็งแห้ง
วิธีทดสอบ
1 การประมวลผลตัวอย่างและการสกัด RNA (พื้นที่การประมวลผลตัวอย่าง)
ขอแนะนำให้ใช้ตัวอย่างของเหลว 200μl สำหรับการสกัด RNAสำหรับขั้นตอนการสกัดที่เกี่ยวข้อง โปรดดูคำแนะนำของชุดสกัด RNA เชิงพาณิชย์ทั้งด้านลบและด้านลบ
ตัวควบคุมในชุดนี้มีส่วนร่วมในการสกัด
2 การเตรียมน้ำยา PCR (พื้นที่เตรียมน้ำยา)
2.1 นำส่วนประกอบทั้งหมดออกจากชุดและละลายและผสมที่อุณหภูมิห้องหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลาสองสามวินาทีก่อนใช้งานคำนวณปริมาณน้ำยาที่ต้องการและเตรียมระบบปฏิกิริยาตามที่แสดงในตารางต่อไปนี้:
| ส่วนประกอบ | เสิร์ฟ N (ระบบ 25µl) |
| ไพรเมอร์ nCOV ส่วนผสมของ TaqMan | 18 µl × N |
| สารละลายปฏิกิริยา RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = จำนวนตัวอย่างที่ทดสอบ + 1 (กลุ่มควบคุมเชิงลบ) + 1 (nCOVการควบคุมเชิงบวก) | |
2.2 หลังจากผสมส่วนประกอบอย่างละเอียดแล้ว ให้ปั่นแยกเป็นเวลาสั้นๆ เพื่อให้ของเหลวทั้งหมดที่อยู่บนผนังท่อตกลงไปที่ด้านล่างของท่อ แล้วแบ่งส่วนระบบขยายขนาด 20 µl ลงในท่อ PCR
3 การสุ่มตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
เพิ่มการควบคุมเชิงลบและบวก5μlหลังจากการสกัดเพิ่ม RNA ของตัวอย่างที่จะทดสอบลงในหลอดปฏิกิริยา PCR
ปิดฝาท่อให้แน่นและหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลาสองสามวินาทีก่อนที่จะส่งไปยังพื้นที่ตรวจจับการขยาย
4 การขยาย PCR (ขยายพื้นที่การตรวจจับ)
4.1 วางหลอดปฏิกิริยาในเซลล์ตัวอย่างของเครื่องมือ และตั้งค่าพารามิเตอร์ดังต่อไปนี้:
| เวที | วัฏจักร ตัวเลข | อุณหภูมิ(°ซ) | เวลา | ของสะสมเว็บไซต์ |
| ย้อนกลับการถอดความ | 1 | 42 | 10 นาที | - |
| Pre-denaturationn | 1 | 95 | 1 นาที | - |
| วัฏจักร | 45 | 95 | 15 วินาที | - |
| 60 | 30 วินาที | การเก็บรวบรวมข้อมูล |
การเลือกช่องตรวจจับอุปกรณ์: เลือกช่อง FAM、HEX、CY5 สำหรับสัญญาณเรืองแสงสำหรับการอ้างอิงไม่มีฟลูออเรสเซนต์ โปรดอย่าเลือก ROX
5 การวิเคราะห์ผลลัพธ์ (โปรดดูคำแนะนำในการทดลองของแต่ละเครื่องมือสำหรับการตั้งค่า)
หลังจากเกิดปฏิกิริยา บันทึกผลลัพธ์หลังจากวิเคราะห์แล้ว ให้ปรับค่าเริ่มต้น ค่าสิ้นสุด และค่าเกณฑ์ของเส้นฐานตามภาพ (ผู้ใช้สามารถปรับได้ตามสถานการณ์จริง โดยสามารถตั้งค่าเริ่มต้นเป็น 3~15 ค่าสิ้นสุดสามารถตั้งค่าเป็น 5~20, การปรับค่า) ในกราฟลอการิทึม ที่ธรณีประตูของหน้าต่าง เส้นธรณีประตูอยู่ในเฟสลอการิทึม และเส้นโค้งการขยายของตัวควบคุมเชิงลบเป็นเส้นตรงหรือต่ำกว่าเส้นธรณีประตู)
6 การควบคุม Quauty (มีการควบคุมขั้นตอนรวมอยู่ในการทดสอบ) การควบคุมเชิงลบ: ไม่มีเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจนสำหรับช่องตรวจจับ FAM, HEX, CY5
การควบคุมเชิงบวกของ COV: เส้นโค้งการขยายที่ชัดเจนของช่องตรวจจับ FAM และ HEX ค่า Ct ≤32 แต่ไม่มีเส้นโค้งการขยายของช่อง CY5
ต้องปฏิบัติตามข้อกำหนดข้างต้นพร้อมกันในการทดลองเดียวกันมิฉะนั้น การทดสอบจะไม่ถูกต้องและจำเป็นต้องทำซ้ำ
7 การกำหนดผลลัพธ์
7.1 หากไม่มีเส้นโค้งการขยายหรือค่า Ct > 40 ในช่อง FAM และ HEX ของตัวอย่างทดสอบ และมีเส้นโค้งการขยายในช่อง CY5 สามารถตัดสินได้ว่าไม่มีไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 (2019-nCoV) RNA ในตัวอย่าง
.2 หากตัวอย่างทดสอบมีกราฟการขยายสัญญาณที่ชัดเจนในช่อง FAM และ HEX และค่า Ct เท่ากับ ≤40 สามารถตัดสินได้ว่าตัวอย่างมีผลบวกต่อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ปี 2019 (2019-nCoV)
7.3 หากตัวอย่างทดสอบมีกราฟการขยายสัญญาณที่ชัดเจนในช่อง FAM หรือ HEX เพียงช่องเดียว และค่า Ct เท่ากับ ≤40 และไม่มีกราฟการขยายสัญญาณในช่องสัญญาณอื่น ต้องทดสอบผลลัพธ์อีกครั้งหากผลการทดสอบซ้ำสอดคล้องกัน ตัวอย่างสามารถตัดสินได้ว่าเป็นบวกสำหรับตัวอย่างใหม่
ไวรัสโคโรนา 2019 (2019-nCoV)หากผลการตรวจซ้ำเป็นลบ อาจตัดสินได้ว่าตัวอย่างตรวจไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 (2019-nCoV) เป็นลบ
ค่าการตัดสินเชิงบวก
วิธีการโค้ง ROC ใช้เพื่อกำหนดค่า CT อ้างอิงของชุดและค่าอ้างอิงการควบคุมภายในคือ 40
การตีความผลการทดสอบ
1. การทดสอบแต่ละครั้งควรได้รับการทดสอบสำหรับการควบคุมเชิงลบและเชิงบวกสามารถระบุผลการทดสอบได้ก็ต่อเมื่อการควบคุมเป็นไปตามข้อกำหนดการควบคุมคุณภาพเท่านั้น
2.เมื่อช่องตรวจจับ FAM และ HEX เป็นบวก ผลลัพธ์จากช่อง CY5 (ช่องควบคุมภายใน) อาจเป็นลบเนื่องจากการแข่งขันของระบบ
3. เมื่อผลการควบคุมภายในเป็นลบ หากช่องตรวจจับ FAM และ HEX ของหลอดทดลองเป็นลบด้วย หมายความว่าระบบปิดใช้งานหรือการทำงานผิดพลาด การทดสอบไม่ถูกต้องดังนั้นจึงจำเป็นต้องทดสอบตัวอย่างซ้ำ
