สินค้า
Lifecosm ชุดตรวจ SARS-Cov-2-RT-PCR สำหรับ 2019-nCoV
การใช้งานที่คาดหวัง
ชุดนี้ใช้สำหรับการตรวจหาเชิงคุณภาพสำหรับเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ (2019-nCoV) โดยใช้ผ้าเช็ดลำคอ ผ้าเช็ดโพรงจมูก น้ำล้างหลอดลมและเสมหะ ผลการตรวจจับผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการอ้างอิงทางคลินิกเท่านั้น และไม่ควรใช้เป็นเพียงอุปกรณ์เดียวเท่านั้น หลักฐานสำหรับการวินิจฉัยทางคลินิกและการรักษา แนะนำให้ทำการวิเคราะห์อาการอย่างครอบคลุมร่วมกับอาการทางคลินิกของผู้ป่วยและการทดสอบในห้องปฏิบัติการอื่น ๆ
หลักการตรวจสอบ
ชุดอุปกรณ์นี้ใช้เทคโนโลยี RT- PCR ในขั้นตอนเดียวในความเป็นจริง ยีน ORF1ab และ N ของไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ (2019-nCoV) ปี 2019 ได้รับเลือกเป็นภูมิภาคเป้าหมายในการขยายไพรเมอร์เฉพาะและโพรบฟลูออเรสเซนต์ (โพรบยีน N มีป้ายกำกับว่า FAM และโพรบ ORF1ab มีป้ายกำกับด้วย HEX) ได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจจับ RNA ของไวรัสโคโรนาชนิดใหม่ปี 2019 ในตัวอย่างชุดนี้ยังประกอบด้วยระบบการตรวจจับการควบคุมภายในภายนอก (โพรบยีนควบคุมภายในที่มีป้ายกำกับ CY5) เพื่อตรวจสอบกระบวนการเก็บตัวอย่าง การขยาย RNA และ PCR ซึ่งช่วยลดผลลัพธ์เชิงลบที่ผิดพลาด
องค์ประกอบหลัก
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ-48T/ชุด- |
| สารละลายปฏิกิริยา RT-PCR | 96ไมโครลิตร |
| ไพรเมอร์ nCOV น้ำยาผสมโพรบ TaqMan (ORF1ab, ยีน N, ยีน RnaseP) | 864ไมโครลิตร |
| การควบคุมเชิงลบ | 1500ไมโครลิตร |
| nCOV การควบคุมเชิงบวก (l ORF1ab N ยีน) | 1500ไมโครลิตร |
รีเอเจนต์ของตัวเอง: การสกัด RNA หรือรีเอเจนต์การทำให้บริสุทธิ์การควบคุมเชิงลบ/เชิงบวก: การควบคุมเชิงบวกคือ RNA ที่มีชิ้นส่วนเป้าหมาย ในขณะที่การควบคุมเชิงลบคือน้ำที่ปราศจากกรดนิวคลีอิกในระหว่างการใช้งานควรมีส่วนร่วมในการสกัดและถือว่าติดเชื้อควรจัดการและกำจัดตามกฎระเบียบที่เกี่ยวข้อง
ยีนอ้างอิงภายในคือยีน RnaseP ของมนุษย์
สภาพการเก็บรักษาและวันหมดอายุ
-20±5°C หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ มากกว่า 5 ครั้ง มีอายุ 6 เดือน
เครื่องมือที่ใช้บังคับ
ด้วย FAM / HEX / CY5 และเครื่องมือ PCR แบบเรืองแสงหลายช่องสัญญาณอื่นๆ
ข้อกำหนดของตัวอย่าง
1. ประเภทของสิ่งส่งตรวจที่ใช้ได้: ไม้กวาดลำคอ, ไม้กวาดโพรงจมูก, น้ำยาล้างหลอดลมและหลอดเลือด, เสมหะ
2.การเก็บตัวอย่าง (เทคนิคปลอดเชื้อ)
ไม้กวาดคอหอย: เช็ดต่อมทอนซิลและผนังคอหอยด้านหลังด้วยไม้กวาดสองชิ้นพร้อมกัน จากนั้นจุ่มหัวไม้กวาดลงในหลอดทดลองที่มีสารละลายเก็บตัวอย่าง
เสมหะ: หลังจากที่ผู้ป่วยมีอาการไออย่างรุนแรง ให้เก็บเสมหะที่ไอในหลอดทดลองที่มีฝาเกลียวซึ่งมีสารละลายเก็บตัวอย่างน้ำยาล้างหลอดลมและหลอดเลือด：เก็บตัวอย่างโดยแพทย์ผู้เชี่ยวชาญ3.การจัดเก็บและขนส่งตัวอย่าง
ตัวอย่างสำหรับการแยกไวรัสและการทดสอบ RNA ควรได้รับการทดสอบโดยเร็วที่สุดตัวอย่างที่สามารถตรวจพบได้ภายใน 24 ชั่วโมงสามารถเก็บไว้ที่ 4°C;ที่ไม่สามารถตรวจพบได้ภายใน 24
ชั่วโมงควรเก็บไว้ที่ -70°C หรือต่ำกว่า (หากไม่มีสภาวะในการจัดเก็บที่ -70°C ก็ควรเก็บไว้
เก็บไว้ชั่วคราวที่อุณหภูมิ -20 ℃ตู้เย็น)ตัวอย่างควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ ในระหว่างการขนส่งควรส่งตัวอย่างไปที่ห้องปฏิบัติการโดยเร็วที่สุดหลังการเก็บตัวอย่างหากจำเป็นต้องขนส่งตัวอย่างในระยะทางไกล แนะนำให้เก็บน้ำแข็งแห้ง
วิธีทดสอบ
1 การประมวลผลตัวอย่างและการสกัด RNA (พื้นที่การประมวลผลตัวอย่าง)
ขอแนะนำให้ใช้ตัวอย่างของเหลว 200μl สำหรับการสกัด RNAสำหรับขั้นตอนการสกัดที่เกี่ยวข้อง โปรดดูคำแนะนำของชุดสกัด RNA เชิงพาณิชย์ทั้งด้านลบและด้านลบ
ส่วนควบคุมในชุดอุปกรณ์นี้เกี่ยวข้องกับการสกัด
2 การเตรียมรีเอเจนต์ PCR (บริเวณการเตรียมรีเอเจนต์)
2.1 นำส่วนประกอบทั้งหมดออกจากชุดอุปกรณ์แล้วละลายและผสมที่อุณหภูมิห้องปั่นแยกที่ 8,000 รอบต่อนาทีสองสามวินาทีก่อนใช้งานคำนวณปริมาณรีเอเจนต์ที่ต้องการ และเตรียมระบบปฏิกิริยาดังแสดงในตารางต่อไปนี้:
| ส่วนประกอบ | N ที่ให้บริการ (ระบบ 25µl) |
| โพรบ nCOV ไพรเมอร์ TaqMan | 18 ไมโครลิตร × N |
| สารละลายปฏิกิริยา RT-PCR | 2 ไมโครลิตร × N |
| *N = จำนวนตัวอย่างที่ทดสอบ + 1 (กลุ่มควบคุมเชิงลบ) + 1 (nCOVการควบคุมเชิงบวก) | |
2.2 หลังจากผสมส่วนประกอบต่างๆ อย่างละเอียดแล้ว ให้ปั่นแยกเป็นเวลาสั้นๆ เพื่อให้ของเหลวทั้งหมดบนผนังท่อตกลงไปที่ด้านล่างของหลอด จากนั้นจึงแบ่งส่วนระบบขยายเสียง 20 µl ลงในหลอด PCR
3 การสุ่มตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
เพิ่ม5μlของตัวควบคุมเชิงลบและบวกหลังจากการสกัดRNA ของตัวอย่างที่จะทดสอบจะถูกเพิ่มลงในหลอดปฏิกิริยา PCR
ปิดฝาหลอดให้แน่นแล้วปั่นแยกที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลาสองสามวินาทีก่อนที่จะถ่ายโอนไปยังพื้นที่ตรวจจับเครื่องขยายเสียง
4 PCR ขยาย (ขยายพื้นที่การตรวจจับ)
4.1 วางท่อปฏิกิริยาลงในเซลล์ตัวอย่างของเครื่องมือ และตั้งค่าพารามิเตอร์ดังต่อไปนี้:
| เวที | วงจร ตัวเลข | อุณหภูมิ(°ซ) | เวลา | ของสะสมเว็บไซต์ |
| ย้อนกลับการถอดความ | 1 | 42 | 10 นาที | - |
| ก่อนการเสื่อมสภาพn | 1 | 95 | 1 นาที | - |
| วงจร | 45 | 95 | 15วิ | - |
| 60 | 30s | การเก็บรวบรวมข้อมูล |
การเลือกช่องการตรวจจับเครื่องมือ: เลือกช่อง FAM、HEX、CY5 สำหรับสัญญาณเรืองแสงสำหรับการอ้างอิงฟลูออเรสเซนต์ NONE โปรดอย่าเลือก ROX
5 การวิเคราะห์ผลลัพธ์ (โปรดดูคำแนะนำการทดลองของแต่ละเครื่องมือสำหรับการตั้งค่า)
หลังจากเกิดปฏิกิริยา ให้บันทึกผลลัพธ์หลังจากการวิเคราะห์ ปรับค่าเริ่มต้น ค่าสิ้นสุด และค่าเกณฑ์ของเส้นพื้นฐานตามภาพ (ผู้ใช้สามารถปรับเปลี่ยนตามสถานการณ์จริง ค่าเริ่มต้นสามารถตั้งค่าเป็น 3~15 ค่าสิ้นสุดสามารถตั้งค่าเป็น 5~20, การปรับค่า) ในกราฟลอการิทึม ที่เกณฑ์ของหน้าต่าง เส้นขีดจำกัดจะอยู่ในเฟสลอการิทึม และเส้นโค้งการขยายของตัวควบคุมเชิงลบจะเป็นเส้นตรงหรือต่ำกว่าเส้นขีดจำกัด)
6 การควบคุม Quauty (การควบคุมขั้นตอนรวมอยู่ในการทดสอบ) การควบคุมเชิงลบ: ไม่มีเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจนสำหรับช่องการตรวจจับ FAM, HEX, CY5n
การควบคุมเชิงบวกของ COV: เส้นโค้งการขยายที่ชัดเจนของช่องการตรวจจับ FAM และ HEX, ค่า Ct ≤32 แต่ไม่มีเส้นโค้งการขยายของช่อง CY5
ต้องเป็นไปตามข้อกำหนดข้างต้นพร้อมกันในการทดลองเดียวกันมิฉะนั้น การทดสอบจะไม่ถูกต้องและจำเป็นต้องทำซ้ำ
7 การกำหนดผลลัพธ์
7.1 หากไม่มีเส้นโค้งการขยายสัญญาณหรือค่า Ct > 40 ในช่อง FAM และ HEX ของตัวอย่างทดสอบ และมีเส้นโค้งการขยายสัญญาณในช่อง CY5 สามารถตัดสินได้ว่าไม่มีไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 (2019-nCoV) RNA ในตัวอย่าง
.2 หากตัวอย่างทดสอบมีเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจนในช่อง FAM และ HEX และค่า Ct เท่ากับ ≤40 สามารถตัดสินได้ว่าตัวอย่างนั้นเป็นผลบวกต่อเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 (2019-nCoV)
7.3 หากตัวอย่างทดสอบมีกราฟการขยายที่ชัดเจนในช่องเดียวของ FAM หรือ HEX และค่า Ct เท่ากับ ≤40 และไม่มีกราฟการขยายในอีกช่องหนึ่ง จำเป็นต้องทดสอบผลลัพธ์อีกครั้งหากผลการทดสอบซ้ำสม่ำเสมอ สามารถตัดสินได้ว่าตัวอย่างเป็นบวกสำหรับตัวอย่างใหม่
ไวรัสโคโรนา 2019 (2019-nCoV)หากผลการตรวจซ้ำเป็นลบ สามารถตัดสินได้ว่าตัวอย่างนั้นเป็นลบสำหรับเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ 2019 (2019-nCoV)
ค่าการตัดสินที่เป็นบวก
วิธีเส้นโค้ง ROC ใช้เพื่อกำหนดค่า CT อ้างอิงของชุดอุปกรณ์และค่าอ้างอิงการควบคุมภายในคือ 40
การตีความผลการทดสอบ
1. การทดลองแต่ละครั้งควรได้รับการทดสอบสำหรับการควบคุมเชิงลบและบวกผลการทดสอบสามารถกำหนดได้เมื่อการควบคุมเป็นไปตามข้อกำหนดการควบคุมคุณภาพเท่านั้น
2.เมื่อช่องการตรวจจับ FAM และ HEX เป็นค่าบวก ผลลัพธ์จากช่อง CY5 (ช่องการควบคุมภายใน) อาจเป็นค่าลบเนื่องจากการแข่งขันของระบบ
3. เมื่อผลการควบคุมภายในเป็นลบ หากช่องการตรวจจับ FAM และ HEX ของหลอดทดลองเป็นลบด้วย หมายความว่าระบบถูกปิดใช้งานหรือการทำงานผิดพลาด แสดงว่าการทดสอบไม่ถูกต้องดังนั้นจึงต้องทดสอบตัวอย่างอีกครั้ง
